基本原理

制備脂質：DNA 復合物的正常程序需要將陽離子脂質懸浮在水性緩沖液中并超聲處理以形成小囊泡。將陽離子脂質囊泡與DNA水溶液以脂質:DNA 10:1的重量比混合，并孵育一段時間。在此溫育過程中，推測帶正電荷的脂質體結合并包覆在 DNA 表面，為 DNA 提供陽離子脂質層，從而促進與細胞膜的相互作用并通過細胞膜轉移。對于小 DNA 片段或寡聚體，例如反義 DNA，DNA 顆粒通常比脂質顆粒小得多。在這種情況下，脂質不包被DNA，而是DNA包被脂質體的表面。這將破壞關鍵的脂質體：細胞表面相互作用并抑制通過膜的轉移。為了有效地包被這些小 DNA 顆粒，脂質需要以單體（或小聚集體）的形式呈現(xiàn)給 DNA。這可以通過將脂質溶解在有機溶劑中并將有機物分散在DNA水溶液中或將脂質和DNA一起在有機溶劑中孵育來實現(xiàn)。選擇的溶劑是乙醇，因為它既與水混溶，又在懸浮液中殘留溶劑時對生物系統(tǒng)無毒。

程序 A（乙醇脂質溶液：低聚物水溶液）

1. 將陽離子脂質溶解在乙醇中。

1. 如果脂質樣品儲存在氯仿中，請使用干燥氮氣或氬氣蒸發(fā)氯仿，并將脂質殘留物置于真空系統(tǒng)上 1 小時以除去殘留的氯仿。

2. 將乙醇添加到干燥的脂質殘留物中，并使用適度的熱量（40-50°C）和超聲處理（如果需要）全部溶解。

3. 調(diào)節(jié)濃度，使添加到低聚物水溶液中的乙醇脂質溶液的體積為水溶液體積的10%。

2. 將低聚物溶解在適當體積的水性緩沖液中。

3. 將乙醇脂質溶液以脂質：低聚物的重量比 10:1 添加到低聚物水溶液中。

1. 通過渦旋或超聲處理全部混合脂質：低聚物懸浮液。

2. 將懸浮液孵育 5-10 分鐘，以形成脂質：低聚物復合物。

3. 如果不需要殘留乙醇，則將懸浮液加熱至 40-50°C，并向懸浮液中鼓入氮氣，直至除去乙醇。

程序 B（乙醇脂質溶液：乙醇低聚物溶液）

1. 將陽離子脂質溶解在乙醇中。

1. 如果脂質樣品儲存在氯仿中，請使用干燥氮氣或氬氣蒸發(fā)氯仿，并將脂質殘留物置于真空系統(tǒng)上 1 小時以除去殘留的氯仿。

2. 將乙醇添加到干燥的脂質殘留物中，并使用適度的熱量（40-50°C）和超聲處理（如果需要）全部溶解。

2. 將低聚物溶解在合適體積的乙醇中。

3. 將乙醇溶液按脂質：低聚物 10:1 的重量比混合。

1. 通過渦旋或超聲處理全部混合脂質：低聚物懸浮液。

2. 將懸浮液孵育 5-10 分鐘，以形成脂質：低聚物復合物。

3. 使用干燥氮氣、氬氣、旋轉蒸發(fā)器等蒸發(fā)乙醇，并在真空系統(tǒng)上干燥脂質殘留物1小時以除去殘余乙醇。

4. 將脂質：低聚物復合物重懸于水性緩沖液中并超聲處理以分散。

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